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folglich durch Aminosäuren in Cdc42 verhindert werden, die nicht mit denen von RhoA

übereinstimmen.

GTPase

Modifizierte Gln in RhoA weitere Gln

RhoA

63 136

29 180

RhoB

63 136

152

180

186

RhoC

63 136

29 123

180

RhoD

-8 1 47 56

RhoG

63 136

4 45 76 124

134

142

143

145

150

163

164

TC10

63 93 118

143

145

164

Rac1

63 4 76 143

164

Cdc42

63 136

4 76 118

164

185

RalA

63 -1 24 54 101

126

138

Tab. E2: Glutamine der getesteten Rho-GTPasen

Dargestellt sind die Glutamine aller getesteten Rho-GTPasen; RhoA-Nummerierung;

Aminosäuresequenzvergleich und Aminosäureaustausch

Um zu klären, welche Aminosäuren die Transglutaminierung verhindern, wurden die

Aminosäuresequenzen von RhoA und Cdc42 verglichen und RhoA-Mutanten hergestellt. In

RhoA ist die Region, in der Glutamin 136 liegt (As 135-140), der so genannten

Transglutaminase-Konsensus-Sequenz sehr ähnlich, einer Aminosäuresequenz (GQDPVK),

die ein besonders effektives Substrat der Gewebstransglutaminase ist. Cdc42 unterscheidet

sich in dieser Region durch drei Aminosäuren von RhoA (Tab. E3). Für die Untersuchung der

Substratspezifität wurden die Aminosäuren 137 und 140 in RhoA gegen die in Cdc42

vorkommenden Aminosäuren ausgetauscht, da sich deren Seitenketten sehr unterschieden.

GTPase „Konsensus-Sequenz“ (As 135-140)

G Q D P V K

RhoA

K Q E

P V K

Cdc42

K Q K

P I T

Tab. E3: Aminosäure 135-140 von RhoA und Cdc42

fett gedruckt: abweichende Aminosäuren;

Die Tests der RhoA-Mutanten zeigten, dass weder das Lysin an Position 137 noch das

Threonin an Position 140 die Transglutaminierung verhinderten. Daraus lässt sich schließen,

dass weder Glutamat 137 noch Lysin 140 in RhoA für diese Reaktion notwendig sind.

Die Transglutaminase-Konsensus-Sequenz ist nicht als Abfolge von Aminosäuren definiert,

die alle notwendig für die Transglutaminierung sind, sondern als sehr effektives Substrat der

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